本发明公开了一种暗色环纹炭团菌的分离方法，包括以下步骤：步骤一、取三七的茎部，洗净，消毒后去除表皮组织，加入无菌水研磨并稀释得到稀释液；取稀释液于改良的PDA培养基上分离培养得到多个菌落；再将多个菌落在改良的PDA培养基上进行纯化培养得多种菌株，然后移至改良的PDA培养基上增殖培养后，保存；步骤二、将步骤一中保存的多种菌株分别和三七黑斑病病原菌进行对峙培养，其抑制率大于或等于90％的菌株即为暗色环纹炭团菌。本发明具有分离方法简单，易操作，分离得到的暗色环纹炭团菌对三七灰霉病、三七圆斑病、苦玄参褐斑病、艾纳香条斑病、广西莪术叶斑病、草豆蔻叶斑病和罗汉果斑枯病等病原菌菌丝抑制率强的有益效果。

本发明具有分离方法简单，易操作，分离得到的暗色环纹炭团菌对三七灰霉病、三七圆斑病、苦玄参褐斑病、艾纳香条斑病、广西莪术叶斑病、草豆蔻叶斑病和罗汉果斑枯病等病原菌菌丝抑制率强的有益效果。